| Sumario: | Las proteínas secretadas por las células podrían ser valiosos biomarcadores en el diagnóstico y pronóstico de tumores. En pacientes con cáncer mamario metastásico se observa una excesiva síntesis y secreción de la enzima lisosomal catepsina D (CatD). Otras catepsinas como la B, H y L, prosaposina (PSAP) y la proteína activadora de GM2 (GM2AP) han sido utilizadas como marcadores diagnósticos y pronósticos en el desarrollo de tumores. A su vez, algunas de estas proteínas lisosomales son reguladas por estrógenos. La sobreexpresión de GM2AP podría estar relacionada con cambios en la composición lipídica que afecta la integridad de la membrana lisosomal, conduciendo a un aumento de su permeabilidad. El transporte selectivo y la localización de proteínas en lisosomas está mediado por el receptor sortilina o por receptores a manosa-6-fosfato (CD-MPR y CI-MPR). El número de lisosomas y los niveles de sus proteasas (CatD) se encuentran aumentados en células tumorales. A su vez, CatD induce apoptosis cuando se libera al citoplasma. Algunas drogas lisosomotrópicas (DL) pueden inducir permeabilización de la membrana lisosomal (PML), conduciendo a un escape de enzimas al citoplasma que pueden desencadenar eventos perjudiciales para las células. La PML puede ser inducida por especies oxidativas (ROS) originadas por drogas pro-oxidativas. Por lo tanto, el uso de moléculas que generan ROS y promueven la PML resulta ser una estrategia terapéutica contra las células tumorales. Objetivo General: Estudiar el sistema endosomal-lisosomal en células tumorales mamarias, su regulación hormonal y su respuesta a la acción de drogas antitumorales conocidas, DL y moléculas inductoras de estrés oxidativo. En las líneas celulares mamarias MCF-10A, MDA-MB-231, MCF-7 y T47D se determinará (en presencia o ausencia de 17-beta-estradiol) si drogas anticancerígenas, DL, o nuevos compuestos de origen natural (terpenoides) con antecedentes pro-oxidativos pueden inducir PML. En este modelo se evaluará en efecto de las drogas sobre: a) La expresión y distribución de catepsinas D, B, L, GM2AP, PSAP, y sus posibles receptores sortilina, CD- y CI-MPR mediante inmunoblot e IFI, b) El estado de la acidificación lisosomal (LysoTracker? Red) y la generación de ROS (sonda fluorescente H2CDFA) , c) La viabilidad celular y capacidad migratoria de las células tumorales.-
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