| Sumario: | Los espermatozoides de mamíferos están recubiertos por una abundante capa de carbohidratos (glicocalix) que se ensambla durante la espermatogénesis y es progresivamente modificada durante su pasaje por el tracto genital femenino. En esta cubierta residen muchas de las capacidades espermáticas (por ejemplo inhibición de la capacitación prematura, el paso a través del moco cervical, la formación del reservorio de espermatozoides y el enmascaramiento de las proteínas de esperma involucradas en la fertilización), sin embargo poco se conoce acerca de cómo cambia durante su pasaje por tracto genital femenino. Estos procesos ocurren fisiológicamente en presencia de fluidos biológicos en los cuales se encuentran elevadas cantidades de glicosidasas que podrían mediar los cambios que ocurren en la superficie de estas células. Por otra parte, la población espermática no es funcionalmente homogénea, pudiendo ser el estado de glicosilación una de las principales diferencias entre las poblaciones seleccionadas a lo largo de las diferentes etapas post-espermatogénicas. En este sentido, el estado del glicocalix podría determinar parámetros funcionales de los espermatozoides como la respuesta quimiotáctica a los ovocitos y/o a diferentes agentes como progesterona o componentes del fluido folicular. Por todo esto, en este proyecto nos proponemos estudiar la incidencia de glicosidasas presentes en los fluidos biológicos y los cambios de la composición glicosídica de los espermatozoides. Además, buscaremos correlacionar el estado de glicosilación con características funcionales como repuestas quimiotácticas y parámetros cualitativos (motilidad, fragmentación de ADN y estado de la cromatina). Se utilizarán diversas tecnologías como western blot, inmunofluorescencia indirecta, citometría de flujo, ensayos de binding a lectinas, espectrofluorometria, ensayos de quimiotaxis, ensayos de fecundación in vitro, entre otros. En definitiva, buscaremos estudiar y caracterizar los cambios que se producen en el glicocalix, lo que podría permitir optimizar algunas técnicas de selección espermática. Nuestra principal hipótesis es que el estado de glicosilación de la membrana de los espermatozoides, como resultado de la acción de glicosidasas, puede ser utilizado como un parámetro indicador de la funcionalidad espermática.
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